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摘要
目的 探讨山奈黄酮醇(KM)对大鼠肝缺血-再灌注损伤(HIRI)的影响和与己糖激酶2(HK2)依赖的糖代谢重编程的关系。方法 采用随机数表法将60只SPF级雄性SD大鼠分为五组：假手术组(Sham组)、肝缺血-再灌注损伤组(HIRI组)、HIRI+山奈黄酮醇预处理组(KM组)、HIRI+山奈黄酮醇+己糖激酶激活剂Hexokinase预处理组(KM+Hex组)和HIRI+Hexokinase预处理组(Hex组)。通过选择性肝门阻断法制备大鼠HIRI模型，KM组、KM+Hex和Hex组于HIRI建模前3 d每日分别腹腔注射KM 50 mg/kg、Hexokinase 20 mg/kg。HIRI模型建立6 h后麻醉处死大鼠，并采集肝脏和下腔静脉血液样本，ELISA法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、白细胞介素-6(IL-6)和肝组织核因子p65亚基(p65)活性，化学比色法检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和丙酮酸含量，蛋白质凝胶电泳实验检测HK2、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸化AMP依赖的蛋白激酶α(p-AMPKα)蛋白表达量，HE染色观察肝脏组织病理改变，免疫组织化学染色后评估肝脏凋亡蛋白裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达水平。结果 与Sham组比较，HIRI组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、活性升高[ALT(μg/L):46.3±7.2 vs. 106.4±18.3; AST(μg/L):61.8±9.7 vs. 190.8±26.1; TBil(μg/L):4.62±0.68 vs. 21.23±2.85; IL-6(ng/L):39.8±6.9 vs. 209.3±30.1; MDA(U/gprot):10.61±2.12 vs. 28.40±4.21;乳酸/丙酮酸比值：11.5±3.1 vs. 61.7±8.9; p65(%):0.97±0.11 vs. 3.85±0.54],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.161.8±20.4; p-AMPKα:0.56±0.09 vs.1.14±0.15],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显升高(HK2:0.61±0.09 vs. 0.16±0.03; LDHA:0.85±0.11 vs. 0.38±0.05; cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs. 1.09±0.13)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻；与HIRI组比较，KM组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性降低[ALT(μg/L):106.4±18.3 vs. 71.6±10.4; AST(μg/L):190.8±26.1 vs. 111.7±17.9; TBil(μg/L):21.23±2.85 vs. 12.34±1.91; IL-6(ng/L):209.3±30.1 vs. 96.5±14.8; MDA(U/gprot):28.40±4.21 vs. 18.26±2.70;乳酸/丙酮酸比值：61.7±8.9 vs. 27.8±5.3; p65(%):3.85±0.54 vs. 2.20±0.31],肝组织SOD含量、p-AMPKα表达升高[SOD(U/g prot):68.9±19.7 vs.115.4±16.8; p-AMPKα:0.56±0.09 vs.0.83±0.12],肝组织HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达明显降低(HK2:0.61±0.09 vs. 0.40±0.07; LDHA:0.85±0.11 vs. 0.51±0.09; cleaved caspase-3:4.74±0.63 vs. 2.66±0.39)(P<0.05),肝细胞损伤明显减轻；与HIRI组比较，KM+Hex组和Hex组血清ALT、AST、TBil、IL-6含量和肝组织MDA含量、乳酸/丙酮酸比值、p65活性升高，肝组织SOD含量、p-AMPKα表达降低，HK2、LDHA和cleaved caspase-3表达升高(P<0.05),肝细胞损伤变性进一步加重。结论 山奈黄酮醇预处理可抑制HK2/LDHA通路减轻HIRI诱导的糖酵解增强，抑制NF-κB介导的炎性反应和氧化应激，改善肝细胞损伤、凋亡。
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