结核分枝杆菌分泌蛋白MPB64小鼠单克隆抗体制备、纯化及鉴定

作者：马荣; 陈振; 黑龙; 赵志军; 徐广贤; 戈朝晖

来源：宁夏医科大学学报, 2015, 37(09): 1013-1016.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2015.09.006

• 结核分枝杆菌
• MPB64
• 单克隆抗体
• 杂交瘤技术

目的应用细胞融合技术制备和鉴定抗MPB64单克隆抗体。方法采用重组目的蛋白p ET32aMPB64(680bp)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合。间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,采用有限稀释方法对所有筛选确认的阳性细胞株进行亚克隆,杂交瘤细胞诱导小鼠产生腹水,再用蛋白G亲和层析法纯化抗体,通过间接ELISA、Western Blot鉴定该单克隆抗体。结果通过杂交瘤技术获得10株可稳定分泌抗MPB64单克隆抗体的细胞株。以命名的"1A3"单抗细胞株进行腹水制备,经鉴定腹水效价>1∶720000,经纯化抗体效价约为1∶720000,抗体浓度2.15mg·m L-1。结论成功制备和获得了抗MPB64单克隆抗体的细胞株,为MPB64单克隆抗体制备和鉴定奠定了基础。

• 单位
  宁夏医科大学总医院; 宁夏医科大学