一种7β-羟基类固醇脱氢酶的酶学性质研究及在熊去氧胆酸生物合成中的应用

作者：刘英梅; 郭新艳; 张秀华; 王丽丽; 刘飞^*; 张晓元; 陈勉; 张艳艳; 袁丹丹

来源：食品与药品, 2022, 24(04): 331-336.

• 熊去氧胆酸
• 7β-羟基类固醇脱氢酶
• 酶学性质
• 绿色生物合成

目的 高效表达7β-羟基类固醇脱氢酶(7β-HSDH)，通过酶学性质研究优化反应条件，用于化学药物中间体7-羰基石胆酸(7K-LCA)向熊去氧胆酸(UDCA)的生物转化。方法 以pET-28a为载体，将7β-HSDH基因在E.coli BL21(DE3)中表达，通过菌种发酵、分离、纯化得到高纯度酶蛋白，并对其酶学性质进行测定，包括最适温度、最适pH、热稳定性及金属离子(主要包括Na+,K+,Cu2+,Mg2+,Mn2+)对酶活的影响。结果7β-HSDH基因可在E.coliBL21(DE3)中可溶性表达，经过分离纯化得到高纯度、高活性的7β-HSDH酶蛋白。酶学性质研究结果表明，100 mmol/L MgCl2条件下酶的比活达83 U/mg，与未添加金属离子的对照53 U/mg相比，酶活提高约57%。反应体系瞬时高温可提高瞬时酶活，有利于缩短反应时间。结论 实现了化学药物中间体7K-LCA向UDCA的酶法生物催化，为酶法生物合成熊去氧胆酸的工业化生产提供了新的实验基础。

• 单位
  山东省药学科学院