寨卡病毒E蛋白在重组杆状病毒中的表达

作者：高寒春; 姚立红; 王超; 郑丽舒

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2017, 31(06): 562-565.

• 寨卡病毒
• 包膜蛋白
• 杆状病毒
• sf9细胞

目的在杆状病毒中表达寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)包膜蛋白(Envelope protein,E蛋白)。方法人工合成ZIKV E基因全长序列(1 518 bp),并克隆到p Fast Bac1载体上,得到重组杆状病毒转移载体pFB1-E,转化含DH10Bac感受态细胞,获得骨架质粒rBacmid-E,转染sf9细胞,得到重组杆状病毒rBac-E。检测病毒滴度,PCR法检测E基因的插入,间接免疫荧光和Western blot法检测E蛋白的表达。结果经PCR方法鉴定,重组杆状病毒骨架质粒构建成功,重组病毒rBac-E(第3代)病毒滴度为2.58×105pfu/ml。提取感染rBac-E的sf9细胞基因组,经PCR扩增得到3 830 bp的条带,间接免疫荧光检测出现特异性绿色荧光。Western blot鉴定可见感染重组杆状病毒rBac-E的细胞沉淀中在相对分子质量55×103处有特异性条带。结论在杆状病毒表达系统中重组表达了ZIKV E蛋白,为ZIKV E蛋白功能研究及疫苗的开发奠定了基础。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所