细胞衰老在老年小鼠急性肾损伤慢性化中的作用与机制研究

作者：王倩; 梁艳; 杨胜楠; 赵倩茹; 李冰; 李馨; 田蕊; 刘章锁^*

来源：中华肾脏病杂志, 2018, 34(01): 44-51.

• 再灌注损伤
• 细胞衰老
• 炎症
• 细胞周期阻滞
• 慢性肾脏病

目的探讨细胞衰老在老年小鼠缺血再灌注所致急性肾损伤慢性化中的作用及其机制。方法青年(8～10周龄)和老年(20～24月龄)C57BL/6雄性小鼠各16只, 用小鼠缺血再灌注损伤模型构建急性肾损伤模型。随机数字表法分为4组:青年假手术(Young-Sham)组、老年假手术(Old-Sham)组、青年缺血再灌注损伤(Young-IRI)组、老年缺血再灌注损伤(Old-IRI)组。术后第1、3、7天称重并尾静脉取血, 术后第14天处死小鼠, 留取全血及双侧肾脏备检。检测血肌酐水平;肾组织标本用苏木精-伊红(HE)染色和天狼星红染色观察肾脏组织形态学改变;免疫荧光法检测Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)、巨噬细胞标志物F4/80及细胞周期阻滞标志物磷酸化组蛋白H3(p-HH3)和细胞核增殖抗原Ki67的表达;Western印迹法检测Collagen-Ⅰ表达;实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)6、转化生长因子β(TGF-β)及Collagen-ⅠmRNA的表达。结果与Sham组相比, Young-IRI组及Old-IRI组小鼠术后血肌酐均明显升高(P<0.05);与Young-IRI组相比, Old-IRI组术后各时间点血肌酐水平均显著增高(均P<0.05)。肾组织病理结果提示, Young-IRI组小鼠术后第14天肾组织大部分损伤已修复;Old-Sham组肾组织有少量炎性细胞浸润及胶原沉积;Old-IRI组肾组织可见大量炎性细胞浸润及胶原沉积。免疫荧光结果显示, 与Young-Sham组相比, Old-Sham组肾组织有散在F4/80阳性巨噬细胞浸润、Collagen-Ⅰ沉积及部分p-HH3及Ki67双阳性的G2/M周期阻滞细胞, 差异有统计学意义(均P<0.05);与Old-Sham组相比, Old-IRI组肾组织上述各项指标相对表达量均显著增加(均P<0.01)。Western印迹结果显示, Old-Sham组Collagen-Ⅰ表达量明显高于Young-Sham组(P<0.05), Old-IRI组Collagen-Ⅰ表达量亦显著高于Young-IRI组(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示:Old-Sham组TNF-α、IL-6、TGF-β及Collagen-Ⅰ mRNA表达量显著高于Young-Sham组(均P<0.05);Old-IRI组TNF-α、IL-6、TGF-β及Collagen-I mRNA表达量均显著高于Young-IRI组(均P<0.01)。结论老年小鼠肾组织存在微炎症、轻度纤维化及部分细胞周期阻滞改变;缺血再灌注损伤可致炎性反应加重且持续, 更多的肾小管上皮细胞发生G2/M细胞周期停滞, 加剧肾脏纤维化的形成。

• 单位
  郑州大学第一附属医院