磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在不同原核表达载体及菌株中的表达分析

作者：腾桥; 陈旗; 夏丽洁^*

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 39(11): 5131-5137.

DOI：10.13417/j.gab.039.005131

• 磷酯酰肌醇蛋白聚糖3
• 融合蛋白
• 表达载体
• 表达菌株

为揭示磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican3, GPC3)在不同原核表达载体、菌株中的表达差异及重组蛋白的最佳表达条件。本研究参照GenBank中人GPC3基因序列(登录号:KR711270.1)设计引物,应用PCR技术扩增基因全长,并将其构建至pET30a-GPC3和pET32a-GPC3两种不同的原核表达载体,而后分别转化于3种不同的表达菌株(大肠杆菌BL21, Rossetta, Transetta)中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达磷酯酰肌醇蛋白聚糖重组融合蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定比较蛋白表达量。为进一步提高重组蛋白的表达量,通过设计不同的诱导剂IPTG浓度(0.3 mmol/L, 0.5 mmol/L, 0.8 mmol/L, 1.0 mmol/L)及不同诱导时间(4 h, 6 h, 8 h, 10 h)等优化诱导条件,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定比较蛋白表达量。实验显示,GPC3去除信号肽后,基因全长1 749 bp,编码583个氨基酸。重组GPC3蛋白在不同表达载体和菌株中表达情况及表达量均有差异。pET32a-GPC3重组质粒在Transetta菌株中表达量最高。重组蛋白在诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导时间为4 h情况下表达量较高。本研究为进一步探究GPC3的生物学功能提供了理论依据。