酵母双杂交技术筛选与绵羊微管解聚蛋白相互作用的蛋白

作者：张丽萌; 李闰婷; 聂晓宁; 李玉华; 刘爱菊; 邢真真; 聂文营; 马润林^*; 王林青^*; 陈龙欣^*

来源：湖南农业大学学报(自然科学版), 2022, 48(02): 201-207.

DOI：10.13331/j.cnki.jhau.2022.02.012

• 绵羊
• 微管解聚蛋白(STMN1)
• 诱饵载体
• c DNA文库
• 酵母双杂交
• 互作蛋白

采用TRIzol法提取绵羊卵巢组织总RNA，运用RT–PCR技术扩增绵羊微管解聚蛋白基因(STMN1)的编码区序列；通过同源重组技术构建重组诱饵表达载体p GBKT7–STMN1，鉴定该诱饵蛋白在酵母双杂交系统中的自激活活性、细胞毒性和表达情况；利用诱饵质粒p GBKT7–STMN1从绵羊卵巢组织细胞的酵母双杂交cDNA文库筛选互作的宿主蛋白。结果显示：成功构建重组诱饵质粒p GBKT7–STMN1，并对酵母细胞无自激活活性和细胞毒性作用，且能在酵母细胞中正常表达；筛选获得12个与STMN1相互作用的克隆，经测序比对分析和点对点验证，得到CREB和FOXM1共2个互作的宿主蛋白，这2个蛋白可能参与调控细胞的增殖、周期、凋亡等过程。

• 单位
  生命科学学院; 吉林医药学院; 郑州师范学院; 河北农业大学; 动物科技学院