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摘要
构建藏猪IGF-1成熟肽基因的真核表达载体,通过毕赤酵母表达系统获得具有生物活性的IGF-1成熟蛋白。根据GenBank中猪IGF-1基因设计1对引物,以构建的藏猪pMD19-T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽基因,并将其克隆于表达载体pPIC9k,获得重组穿梭质粒pPIC9k-IGF-1,电转毕赤酵母GS115感受态,对重组酵母转化子经MM、MD平板筛选和PCR鉴定后,经G418抗性梯度筛选,获得多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达后进行Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析。Tricne-SDS-PAGE和Dot blot分析显示,表达的目的蛋白分子质量约为13 ku,获得成功表达;CCK8法检测显示,纯化后的IGF-1重组蛋白能够促进细胞增殖。表明,本研究成功构建了藏猪IGF-1成熟肽真核表达质粒pPIC9k-IGF-1,并在毕赤酵母GS115中得到了有效表达,表达产物具有促进细胞增殖的生物活性。
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单位成都农业科技职业学院; 重庆市畜牧科学院; 四川农业大学
