兔出血症病毒特异性核酸适配体的筛选

作者：焦美会; 刘家森; 姜骞; 陆涛峰; 胡小亮; 蒋艳妹; 曲连东

来源：中国动物传染病学报, 2017, 25(02): 9-13.

• 兔出血症病毒
• 适配体
• SELEX技术

为筛选出兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60特异性核酸适配体,建立新型的兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)检测方法,本研究构建了一个长80 nt的随机寡核苷酸文库。以固定在PVDF膜上的VP60为靶分子,使用消减SELEX技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)进行20轮的筛选,以生物素标记的次级文库作为"一抗",以辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素作为"二抗",对文库进行Western blot鉴定,结果表明第20轮文库存在可特异性的识别VP60的核酸序列。随机选取第20轮文库的46条序列克隆、测序,得到20个高度同源序列,同时对46个适配体再次鉴定,最终得到3个特异性识别VP60的适配体。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室