产肠毒素大肠埃希菌sfmH基因的原核表达及多克隆抗体的制备

作者：丁雪燕; 岑雪; 田延; 吴文文; 夏芃芃^*; 朱国强^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2018, 39(04): 12-16.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2018.04.003

• 产肠毒素大肠埃希菌F4ac
• Sfm菌毛
• sfmH基因
• 原核表达

以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行探究,发现重组菌在0.8mmol·L-1IPTG、25℃诱导7h时蛋白表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为26ku。将重组蛋白在最优诱导条件下进行大量表达并纯化,利用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得SfmH多克隆抗体(简称多抗),通过ELISA和Western blot试验对多抗效价和特异性进行鉴定。这一研究构建并获得了高纯度的融合蛋白rSfmH,将其免疫小鼠后成功获得鼠源高免血清,为进一步探究Sfm菌毛的功能奠定了研究基础。

• 单位
  扬州大学; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心