B型肉毒毒素单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制

作者：潘宪云; 彭林峰; 张甲菊; 康玺泰; 张正雷; 罗广; 席仲兴^*

来源：微生物学免疫学进展, 2023, 51(01): 18-25.

DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2023.01.003

• B型肉毒毒素
• 杂交瘤
• 单克隆抗体
• 酶联免疫吸附测定
• 定量限
• 试剂盒
• 抗原识别表位

目的 建立B型肉毒毒素(botulinum toxin B, BoNT/B)快速检测方法，研制B型肉毒毒素酶联免疫吸附测定(ELISA)检测试剂盒。方法 以B型肉毒类毒素为抗原免疫小鼠，用杂交瘤技术获得鼠源单克隆抗体(单抗),体内法扩大制备单抗。间接ELISA测定杂交瘤细胞株分泌单抗的稳定性、腹水效价以及单抗的亚型、理化性质和抗原识别表位。过碘酸钠法对抗原表位差异较大的抗体进行HRP标记，筛选最佳包被抗体和标记抗体，并确定包被抗体包被浓度和标记抗体工作浓度。将其配制成试剂盒，对试剂盒的线性、定量限、准确度和重复性等进行研究。结果 筛选、鉴定8株能稳定分泌B型肉毒毒素特异性单抗的杂交瘤细胞株。8株单抗腹水效价1∶32 000～1∶512 000,重链为IgG类、轻链为κ型，均耐碱、耐热，不耐酸，其中4C11、4D7、7F9和8D2 4株单抗抗原表位差异较大。以4D7为包被抗体、8D2为标记抗体配制试剂盒，B型肉毒毒素滴度在2～32 LD50/mL范围内呈现良好的线性(r=0.996),定量限为0.96 LD50/mL,试剂盒2～8℃有效期为12个月，与A、C、D、E和F型肉毒毒素均无交叉反应。B型肉毒毒素3、6、12、24 LD50/mL的回收率均在85%～115%之间，重复性CV≤15%。结论 筛选得到8株鼠源单抗，建立了B型肉毒毒素快速ELISA检测方法，研制了检测周期短且高灵敏度的B型肉毒毒素ELISA检测试剂盒。

• 单位
  兰州生物制品研究所有限责任公司