iTRAQ技术鉴定TCDD与维甲酸致胎鼠腭裂共同表达的差异蛋白质

作者：翟莎娜; 王晨; 傅跃先^*; 袁心刚; 张丁文

来源：中华整形外科杂志, 2017, 33(04): 278-284.

• 蛋白质组学
• 腭裂
• 疾病模型, 动物
• 2, 3, 7, 8-四氯二苯二噁英
• 维甲酸

目的应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术结合质谱分析筛选2, 3, 7, 8-四氯二苯二噁英(2, 3, 7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, TCDD)与维甲酸致胎鼠腭裂发生的共同差异表达蛋白质。方法将36只C57BL/6J孕鼠按照随机数表法分为3组, 每组12只。分别以28 μg/kg TCDD、80 mg/kg维甲酸在C57BL/6J孕鼠第10.5个妊娠日(gestational day 10.5, GD10.5)灌胃, 建立胎鼠腭裂模型, 对照组给予等量玉米油灌胃, 于GD17.5观察胎鼠腭部的解剖学及组织学改变;取TCDD组、维甲酸组与对照组GD17.5胎鼠的腭组织, 从中提取总蛋白质, 采用iTRAQ技术联合二维液相色谱-串联质谱分析和鉴定实验组与对照组的差异表达蛋白质;用Western Blot对Annexin A1、14-3-3 sigma差异蛋白进行表达验证。实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析, 腭裂发生率的比较采用卡方检验, 3组目的蛋白相对表达量比较采用单因素方差分析, 方差齐性分析采用Levene检验, 组间比较采用Turkey HSD检验, P<0.05为差异有统计学意义。结果①成功建立了胎鼠腭裂模型, TCDD组与维甲酸组腭裂发生率分别为97.1%(68/70)和98.6%(70/71), 2组比较差异无统计学意义(χ2=0.00, P>0.05), 腭裂表型在形态学上相似。②共鉴定出2 996个蛋白质, TCDD组、维甲酸组与对照组比较, 分别筛选出差异蛋白75个和90个, 2个实验组共同表达的差异蛋白有18个。③Western Blot结果显示, Annexin A1蛋白表达水平对照组为0.52±0.11, TCDD组和维甲酸组分别为0.99±0.34和0.98±0.31, 分别与对照组比较, 差异均有统计学意义(P<0.05);14-3-3 sigma蛋白表达水平对照组为0.55±0.15, TCDD组和维甲酸组分别为0.86±0.17和0.93±0.13, 分别与对照组比较, 差异均有统计学意义(P<0.05), 与iTRAQ检测结果一致。结论应用iTRAQ技术能够快速、有效地筛选TCDD与维甲酸致C57BL/6J胎鼠腭裂发生的共同表达的差异蛋白, 这些差异蛋白可能与TCDD、维甲酸致胎鼠腭裂发生密切相关。