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摘要
AIM2炎症复合体参与了自身免疫性疾病和机体抵御病原体的过程，研究其激活机制具有重要的意义。为了在体外构建AIM2炎症复合体的活化体系，本研究通过PCR方法从人单核细胞（THP-1细胞）中扩增AIM2、ASC、pro-Caspase-1、pro-IL-1β基因片段后构建重组质粒p3×Flag-AIM2、p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1和p3×Flag-pro-IL-1β，并转染HEK293T细胞，采用western blot鉴定各蛋白的表达。结果显示，约在41.9 ku、34.1 ku、48.5ku、24.6 ku处出现特异性条带，表明融合Flag标签的AIM2、ASC、Caspase-1和IL-1β蛋白在HEK293T细胞中获得了表达。除此之外，还可以在HEK293T细胞中检测到39 ku的内源性AIM2蛋白特异性条带，表明HEK293T细胞自身表达内源性AIM2蛋白。将不同浓度比例的重组质粒共转染HEK293T细胞，并转染poly(dA:dT)作用，采用间接ELISA检测IL-1β的分泌水平。结果显示，空白对照组、只转染p3×Flag-pro-IL-1β的实验组和共转染p3×Flag-ASC、p3×Flagpro-IL-1β的实验组细胞上清中均未检测到IL-1β，共转染p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1、p3×Flag-pro-IL-1β和共转染p3×Flag-AIM2、p3×Flag-ASC、p3×Flag-pro-Caspase-1、p3×Flag-pro-IL-1β的实验组细胞上清中均能检测到高浓度的IL-1β，且转染了p3×Flag-AIM2的实验组中HEK293T细胞的IL-1β分泌水平更高。此外，poly(dA:dT)刺激后，与对照组相比，IL-1β的分泌水平显著升高（P<0.001），表明AIM2炎症复合体的体外活化体系正确构建。将不同浓度的p3×Flag-AIM2与其它质粒共转染HEK293T细胞，并转染poly(dA:dT)作用，采用间接ELISA检测IL-1β的分泌水平。结果显示，无论是否转染poly(dA:dT)，随着p3×Flag-AIM2的转染剂量的升高，IL-1β的分泌水平显著升高（P<0.001、P<0.01、P<0.5、P<0.001），表明细胞中AIM2蛋白的表达量与AIM2炎症复合体的活性呈正相关。单增李斯特菌已被证实可以激活AIM2炎症复合体，用该菌感染上述炎症复合体活化体系，检测胞内细菌存活情况。结果显示，细胞内单增李斯特菌的数量在感染2 h和6 h显著低于对照组（P<0.001、P<0.01），这表明AIM2炎症复合体活化体系发挥了抗病原微生物感染的作用。以上结果表明，本研究成功构建AIM2炎症复合体活化体系，并初步通过该活化体系证实AIM2炎症复合体具有抗感染功能，为后续研究该活化体系具体作用机制奠定了基础。
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单位浙江农林大学; 动物科技学院
