牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白的中华仓鼠卵巢细胞表达及免疫原性分析

作者：李亚军; 茹毅; 郝荣增; 秦晓东; 卢炳州; 杨洋; 刘华南; 张越; 龚真莉; 刘艳红; 余四九^*; 郑海学^*

来源：生物工程学报, 2023, 39(12): 4861-4873.

DOI：10.13345/j.cjb.230084

• 牛病毒性腹泻病毒
• rns蛋白" name="keyword">Erns蛋白
• 真核表达
• 中华仓鼠卵巢(CHO)细胞悬浮培养
• 免疫原性

本研究利用中华仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV) Erns蛋白，并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL标准毒株基因序列为基础，构建BVDV Erns蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-Erns，转染悬浮培养的CHO细胞，进行上清分泌表达。SDS-PAGE分析Erns蛋白的表达和纯化，并用抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清进行Western blotting鉴定纯化蛋白；进一步使用纯化的Erns蛋白免疫新西兰大白兔，通过间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光(indirect immunofluorescence,IFA)实验检测血清抗体水平及其免疫反应活性，用病毒中和实验测定免疫兔血清的中和抗体滴度。BCA蛋白定量试剂盒检测纯化的Erns蛋白浓度为0.886 mg/m L,Western blotting结果显示，抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的Erns蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA实验结果显示，一免后第7天血清抗体呈阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平可达1:128 000，且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV病毒发生特异性免疫反应。重组Erns蛋白免疫兔可诱导动物机体产生病毒中和抗体，中和效价为log10=2.71。本研究利用CHO细胞表达系统成功制备了纯化的BVDV Erns蛋白，并通过体内和体外实验证明，该重组蛋白具有良好的免疫原性，为牛病毒性腹泻(bovine viral diarrhea,BVD)诊断方法及新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。

• 单位
  兰州大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 甘肃农业大学