过表达Glypican-3对高转移性肝癌细胞HCCLM3生物学行为的影响

作者：张晶晶; 金小宝; 李小波; 汪洁; 马艳

来源：生物技术通报, 2017, 33(12): 176-184.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0616

• soluble blypican-3
• glypican-3
• 真核表达载体
• 高转移性肝癌细胞
• 生物学行为

旨在构建s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体,研究过表达s GPC3/GPC3对HCCLM3人高转移性肝癌细胞生物学行为的影响。采用PCR法获得编码s GPC3/GPC3的基因片段并克隆到真核表达载体pc DNA3.0-GFP中,经脂质体介导转染HCCLM3肝癌细胞,RT-PCR和Western blot检测GPC3的表达情况;CCK-8法、克隆平板形成实验、细胞划痕实验、流式细胞术分别检测s GPC3/GPC3对HCCLM3生物学行为的影响。酶切分析、测序鉴定结果表明s GPC3/GPC3基因重组真核表达载体构建成功;RT-PCR和Western blot结果显示s GPC3/GPC3在HCCLM3中成功过表达。与正常组和转染空载体相比,过表达s GPC3/GPC3后,HCCLM3的增殖能力和克隆形成能力均受到明显抑制(P<0.05),迁移率显著下降,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率增加。同时,过表达s GPC3对细胞的影响显著优于GPC3(P<0.05)。s GPC3/GPC3表达上调抑制高转移性肝癌细胞HCCLM3生长和迁移,促进细胞凋亡以及周期再分布,在高转移性肝癌发生发展过程中起重要作用。

• 单位
  广东药科大学