小鼠骨髓间充质干细胞的稳定高效培养及外泌体的提取

作者：程欢; 苏盖; 陶思跃; 尤涛^*

来源：安徽医科大学学报, 2020, 55(04): 518-522.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.04.007

• 小鼠
• 骨髓间充质干细胞
• 全骨髓
• 差速贴壁
• 低氧培养
• 外泌体

目的建立稳定、高效的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)培养及外泌体提取方法。方法通过全骨髓、差速贴壁并辅助以低氧(5%O2)环境的方法进行小鼠BM-MSCs培养,收集细胞,鉴定干细胞表面标志物,进行成骨、成脂及成软骨诱导;并收集上清液,超速分离的方法提取外泌体后鉴定。结果小鼠BM-MSCs生长状态好,第3代细胞就可达到95%以上的纯度且可稳定传代至15代左右,表达间充质干细胞(MSCs)标志物,且可被成功诱导分化成骨、成脂肪及软骨组织。超速离心得到的细胞外囊泡具有典型外泌体样结构,Western blot鉴定显示具有外泌体特征性蛋白标志物。结论全骨髓培养方法使得小鼠BM-MSCs的损失最少,低氧(5%O2)环境下的差速贴壁法使得小鼠BM-MSCs增殖速度快,纯度高。该方法培养的小鼠BM-MSCs可稳定分泌外泌体囊泡,为小鼠MSCs的培养及其外泌体获取提供了良好的方法。

• 单位
  安徽医科大学第一附属医院