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摘要
目的：基于PsbA-trnH片段，利用测序技术寻找野生和栽培地黄此区域序列差异位点，为地黄野生和栽培种的分子鉴定提供依据。方法：提取地黄叶片的DNA，以PsbA-trnH序列通用引物进行PCR扩增，扩增产物经纯化后测序，利用MEGA 7.0软件比对寻找差异位点，基于差异位点设计特异性引物，采用两步法进行PCR扩增，优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性考察。结果：建立了野生和栽培地黄的位点特异性PCR鉴别方法：引物的序列为ZP1-F:TTT AGT ATT TAA TAT TTG AT,ZP1-R:CAA ATT CGA CTT TTT GCT GA；反应体系：2×Taq Plus Master Mix 12.5μL，上下游引物各1μL(10μmol/L),DNA模板1μL,ddH2O 9.5μL；扩增程序：95℃1 min;95℃10 s,39℃30 s,30×；72℃15 s。栽培地黄均能在100～200 bp之间扩增出2条条带，野生地黄无条带，方法的适用性和普适性良好。结论：本次实验所建立的特异性PCR鉴别方法可作为野生种和栽培种地黄鉴定准确而有效的分子方法。
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