鉴定活性维生素D细胞模型的构建

作者：程佳; 王永吉

来源：现代食品科技, 2017, 33(08): 36-40.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.8.007

• 维生素D受体
• 融合蛋白
• 细胞模型

本文构建了维生素D受体(Vitamin D receptor,VDR)融合蛋白的真核表达载体,并获得稳定表达VDR融合蛋白的细胞体系,为含有活性维生素D食品及药物的鉴定建立成熟的细胞模型。设计并合成特异性引物扩增VDR基因,将扩增产物克隆至pcDNA3.1/His真核表达载体上,将其转染HEK293细胞。采用免疫沉淀(IP)技术鉴定VDR融合蛋白的表达效率。在构建pcDNA 3.1/VDR-His成功的基础上,用活性1,25(OH)2D3处理转染的细胞,收集总蛋白和m RNA,分别利用免疫印迹(Western blot,WB)和实时定量PCR(q RT-PCR)技术,检测VDR融合蛋白以及其下游基因CYP24A1基因的表达。IP结果证实VDR融合蛋白具有转录活性。WB和q RT-PCR结果显示,1 nmol/L浓度的活性1,25(OH)2D3处理转染细胞能有效激活VDR蛋白的表达,以及显著增强CYP24A1的m RNA表达(p<0.01)。利用该细胞模型检测维生素D类药物的活性,结果显示不同药物中维生素D的活性与药物种类有关。pcDNA3.1/VDR-His融合表达载体构建成功,并以此构建了鉴定活性维生素D的细胞模型。

• 单位
  陕西理工大学