摘要
目的:探讨食管癌细胞EC109分泌的外泌体(EC109 derived exosomes, EC109-ex)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)成管能力的促进作用。方法:培养食管癌细胞EC109至对数生长期,收集细胞上清液,梯度-超速离心法提取外泌体,并采用蛋白质印迹法检测外泌体的表面特异性分子CD9、CD63,透射电镜观察外泌体的结构和粒径。荧光染料CM-DiR标记EC109-ex并与HUVECs共培养,荧光显微镜观察HUVECs摄取EC109-ex。分别加入PBS(对照组)、EC109-ex(5μg/mL和10μg/mL)与HUVECs共培养,通过Transwell和细胞成管实验观察EC109-ex对于HUVECs的侵袭和成管能力的促进作用,通过蛋白质印迹法检测HUVECs血管特异性标志物CD31、CD34和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:EC109-ex能够定位于HUVECs的胞质。与对照组相比,与EC109-ex共培养后,HUVECs的侵袭(P<0.01)和成管能力(P<0.01)均显著提高,血管特异性标志物CD31、CD34和VEGF的表达也显著增强(P<0.01)。结论:食管癌细胞可通过旁分泌外泌体途径促进肿瘤血管的生成。
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单位南京医科大学康达学院