兔干眼细胞模型的建立与生物学特征评价

作者：李玲; 朱梦晨; 李点^*; 杨婷婷; 邱婷; 王健

来源：国际眼科杂志, 2021, 21(02): 217-221.

• 兔泪腺上皮细胞
• 原代培养
• 干眼细胞模型
• 脂多糖
• 肿瘤坏死因子-α

目的:通过体外分离及培养泪腺上皮细胞,建立干眼细胞模型,分析相关炎症因子,为进一步探究干眼治疗的有效药物奠定基础。方法:体外分离培养兔泪腺上皮细胞,并采用细胞增殖实验和免疫荧光实验对原代细胞活性和纯度进行鉴定。根据脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的IC50值,采用两者的0.5倍IC50刺激兔泪腺上皮细胞,构建干眼细胞模型即LPS组和TNF-α组,并通过细胞增殖实验、ELISA和流式方法对比两种构建干眼细胞模型的相关生物学特征。结果:兔泪腺上皮原代细胞培养12h后细胞基本贴壁,48h可见细胞形态舒展,呈长三角形。兔泪腺上皮原代细胞活性为92%以上,标志角化蛋白(Pan-cytoeratin)阳性率>90%,符合实验要求。LPS和TNF-α12h的IC50分别为20μg/mL、4.996ng/mL,采用LPS(10μg/mL)和TNF-α(2.5ng/mL)干预细胞12h后:两组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.01),组间比较,TNF-α组细胞凋亡率高于LPS组(P<0.01);两组细胞上清液中IL-1β和IL-6的含量均明显高于空白对照组(P<0.01),组间比较,TNF-α组IL-1β和IL-6的含量明显高于LPS组(P<0.01)。提示TNF-α模拟干眼的炎症反应效果优于LPS。结论:本研究成功建立了一种细胞纯度较高、相对简便、快速,模型稳定的兔干眼细胞模型,为兔泪腺上皮细胞功能及干眼的基础研究提供了更稳定的体外实验模型。

• 单位
  湖南中医药大学; 湖南中医药大学第一附属医院