高车前素通过调控Orai1介导的Ca²⁺内流对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响

作者：李光辉; 王前进; 王俊杰; 李明

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2023, 25(02): 628-636.

• 高车前素
• 软骨细胞
• 钙释放激活钙通道调节分子1
• 细胞凋亡

目的 探讨高车前素（His）对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响，并初步阐明其作用机制。方法 分离大鼠膝骨关节软骨细胞，采用10 ng·mL-1 IL-1β处理软骨细胞建立骨关节炎细胞模型，并采用不同浓度(5、10、20μmol·L-1)His处理24 h。采用CCK-8检测细胞增殖活性；ELISA法检测细胞培养液中炎症因子IL-6和TNF-α水平；流式细胞术检测细胞凋亡水平及细胞内Ca2+浓度；Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、钙释放激活钙通道调节分子1（Orai1）及内质网应激相关蛋白CHOP、GRP78表达水平。将Orai1过表达质粒（pcDNA-Orai1）转染至软骨细胞中，采用10 ng·mL-1 IL-1β联合20μmol·L-1His处理24 h后，流式细胞术检测细胞凋亡水平；Fluo-4/AM荧光探针标记法检测细胞内Ca2+浓度。结果 10 ng·mL-1 IL-1β可降低大鼠软骨细胞增殖活性，诱导软骨细胞凋亡，提高细胞培养液中IL-6和TNF-α水平以及细胞内Ca2+浓度，上调细胞中Bax、cleaved-Caspase-3、Orai1、CHOP和GRP78等蛋白表达水平，下调Bcl-2蛋白表达水平。His可提高IL-1β处理的软骨细胞增殖活性，抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡，并降低细胞培养液中IL-6和TNF-α水平以及细胞内Ca2+浓度，下调细胞中Bax、cleaved-Caspase-3、Orai1、CHOP和GRP78等蛋白表达水平，上调Bcl-2蛋白表达水平。Orai1过表达可逆转His对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及胞内Ca2+浓度的影响。结论 His可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡，其作用机制可能与下调Orai1介导Ca2+内流引起的内质网应激凋亡途径有关。

• 单位
  河南省中医院; 河南中医药大学