非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

作者：马天天; 张亚楠; 冯亚文; 岳怀宁; 王亚文; 苏恺; 袁晨; 逯纪成; 孙泰然; 薛文阁; 宋勤叶^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(07): 2832-2842.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.07.023

• 非洲猪瘟病毒(ASFV)
• p30蛋白
• 单克隆抗体
• 表位

【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)p30蛋白单克隆抗体，为ASFV检测方法的研究提供重要试验材料。【方法】应用大肠杆菌表达重组ASFV p30蛋白，并用该蛋白免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠，应用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合；通过间接ELISA方法筛选分泌p30蛋白特异性抗体的阳性杂交瘤细胞，腹腔接种小鼠制备腹水抗体；应用ELISA方法鉴定单克隆抗体的类/亚类，通过Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定单克隆抗体与p30-N端(1―105位氨基酸)和p30-C端(100―194位氨基酸)区域的反应活性；针对抗体识别的p30蛋白区域合成不同肽段，通过ELISA和斑点免疫印迹法鉴定抗体识别的抗原表位。应用间接ELISA方法分析单克隆抗体与ASFV p72蛋白、猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳(Cap)蛋白、猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的交叉反应性，以及ASFV抗血清对单克隆抗体抗原结合活性的阻断作用。【结果】获得了2株杂交瘤细胞(C7和G10),其分泌的单克隆抗体(C7和G10)都属于IgG1亚类和κ型(IgG1κ),杂交瘤细胞培养上清和腹水内C7和G10的抗体效价分别为1∶1 280、1∶640与1∶107、1∶106;2株抗体均与p30-C端(100―194位氨基酸)区域特异性结合，并识别同一个抗原表位115CTSSFETLFEQEPSSEVPKD134;2株抗体与ASFV p72蛋白、PCV2 Cap蛋白及PEDV S蛋白无交叉反应；ASFV抗血清能有效阻断2株单克隆抗体与p30蛋白结合。【结论】获得2株分泌p30单克隆抗体的杂交瘤细胞株，鉴定了单克隆抗体的抗原识别表位，丰富了p30蛋白的抗原表位信息，为ASFV致病机制的进一步研究提供支撑。

• 单位
  河北省兽药监察所; 河北农业大学