瓜蒌皮提取物基于PI3K/Akt/NO信号通路保护缺氧/复氧损伤心肌细胞的机制

作者：楚冬海; 张振秋^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2019, 25(22): 42-48.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20192104

• 瓜蒌皮提取物
• 缺氧/复氧损伤
• 心肌细胞
• 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮(PI3K/Akt/NO)

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮(PI3K/Akt/NO)信号通路在瓜蒌皮提取物保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法:以2.5 mmol·L-1Na2S2O4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物组及抑制剂组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌细胞中一氧化氮(NO)的释放量及内皮型一氧化氮合酶(e NOS),诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的活性水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中Akt,e NOS,i NOS mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Akt,磷酸化Akt(p-Akt),e NOS,i NOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显下降(P<0.01),心肌细胞NO释放量减少(P<0.01),心肌细胞中p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),而i NOS mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,瓜蒌皮提取物预处理24 h后能改善心肌细胞形态,明显提高心肌细胞活力(P<0.01)。瓜蒌皮提取物能促进p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达(P<0.01),抑制i NOS mRNA和蛋白的表达(P<0.01),增加心肌细胞NO的释放量(P<0.01)。PI3K抑制剂LY294002与瓜蒌皮提取物联合处理后,逆转了瓜蒌皮提取物对心肌细胞的上述作用,导致细胞存活率下降。结论:瓜蒌皮提取物可能通过激活PI3K/Akt信号通路上调e NOS,下调i NOS的表达,增加内源性NO的基础含量水平,发挥抗凋亡作用,从而改善缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞损伤。

• 单位
  辽宁科技学院; 辽宁中医药大学