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摘要
目的探讨抑制元素-1沉默转录因子(REST)、REST辅助抑制因子(CoREST)对创伤性脑损伤(TBI)后皮层神经元轴突再生及修复的影响。方法(1)体外原代培养C57BL/6胎鼠大脑皮层神经元,实时定量PCR(q-PCR)检测神经元培养1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d后微小RNA-124(miR-124)的表达;(2)将培养5 d后神经元分为miR-124模拟物组、空白对照组、miR-124抑制物组,分别转染miR-124模拟物、无义对照序列、miR-124抑制物。转染后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h采用q-PCR检测神经元miR-124的表达;(3)将培养7 d后神经元分为空白对照组、氧糖剥夺(OGD)模型组、上调miR-124+OGD模型组、下调miR-124+OGD模型组,后2组细胞分别转染miR-124模拟物和miR-124抑制物。转染48 h后3组细胞均制备OGD模型,q-PCR检测OGD处理后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72h各组神经元miR-124的表达;Western blotting检测OGD处理后48 h神经元生长相关蛋白43 (GAP-43)、REST,CoREST的表达;免疫荧光染色检测OGD处理后48h神经元REST、CoREST的表达。结果(1)皮层神经元培养1、3、5、7 d后miR-124的表达逐渐增高,皮层神经元培养7、9、11 d后miR-124的表达逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)转染后24、48hmiR-124抑制物组神经元miR-124的表达低于空白对照组。转染后12 h、24 h、48 h、72h miR-124模拟物组神经元miR-124的表达高于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。其中转染后48 h神经元miR-124的表达最高。(3)q-PCR检测显示,OGD处理后12 h、24 h、48h、72h OGD模型组神经元miR-124的表达高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其中OGD处理后48 h最高;OGD处理后0h、6 h、12 h、24 h、48 h、72h,上调miR-124+OGD模型组神经元miR-124的表达高于空白对照组和OGD模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其中OGD处理后48h最高;Western blotting检测显示空白对照组,OGD模型组、下调miR-124+OGD模型组皮层神经元GAP-43、CoREST的表达依次增高,REST的表达依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。上调miR-124+OGD模型组神经元GAP-43、CoREST的表达低于OGD模型组,REST的表达高于OGD模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色检测结果与Western blotting检测结果一致。结论REST、CoREST作为一对调节子,可能是TBI后神经元轴突修复及再生的关键因素。
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单位中国人民解放军空军军医大学; 西京医院; 西安市第三医院; 唐都医院
