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摘要
目的探索生长分化因子11（GDF-11）对软脂酸（PA）诱导的小鼠主动脉内皮细胞（MAECs）的作用及其相关机制。方法通过加或不加内皮型一氧化氮合酶（eNOS）抑制剂N-硝基-L广精氨酸甲酯（L-NAME）或Smad3抑制剂SIS3研究eNOS和Smad通路在GDF-11保护软脂酸诱导的MAECs中的作用,将MAECs分为:（1）对照组;（2）PA组;（3）PA+GDF-11组;（4）PA+GDF-11+L-NAME组;（5）PA+GDF-11+SIS3组,培养24 h后,活性氧试剂盒及实时-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞氧化应激水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blotting法检测各组抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax及Cleaved-caspase3蛋白表达水平。研究GDF-11对MAECs Smad信号通路的影响,MAECs分为:（1）对照组;（2）GDF-11组;（3）GDF-11+转化生长因子β（TGF-β）受体I抑制剂组（GDF-11+SB431542组）,培养30min后,免疫荧光染色法检测各组MAECs细胞磷酸化Smad2/3（P-Smad2/3）表达水平;研究GDF-11对MAECsAMPK/eNOS信号通路的影响,MAECs分为:（1）对照组;（2）GDF-11组;（3）GDF-11+AMPK抑制剂Compound C组;（4）GDF-11+L-NAME组;（5）GDF-11+Compound C+L-NAME组,培养30min后,Western blotting法检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK（P-AMPK）、eNOS、磷酸化eNOS（P-eNOS）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（P-Akt）、蛋白激酶A（PKA）、磷酸化PKA（P-PKA）水平。多组之间比较采用单因素方差分析,组间多重比较用最小显著性差异￡检验。结果与对照组相比,PA组细胞氧化应激和凋亡率显著增加（28.9%±2.2%比7.9%±1.5%）,PA+GDF-11组细胞氧化应激和凋亡率明显低于PA组（12.6%±1.6%比28.9%±2.2%）,而PA+GDF-1I+L-NAME组和PA+GDF-11+SIS3组细胞氧化应激和凋亡率又明显低于PA+GDF-11组（分别为21.8%±2.0%、20.1%±1.8%、12.6%±1.6%,F=97.89,P<0.05）。与对照组相比,GDF-11组P-Smad2/3表达水平明显增加,而GDF-11+SB431542组P-Smad2/3表达水平明显降低（F=325.30,P<0.05）。与对照组相比,GDF-11组P-AMPK/AMPK、P-eNOS/eNOS水平显著提高,P-Akt/Akt、P-PKA/PKA水平无明显差异,分别加入了Compound C、L-NAME或者Compound C联合L-NAME显著抑制了P-AMPK/AMPK、P-eNOS/eNOS表达水平（F=237.65、281.08,均P<0.05）,而对P-Akt/Akt、P-PKA-PKA水平无明显影响（F=1.94、1.48,均P>0.05）。结论 GDF-11可抗软脂酸诱导的MAECs氧化应激和凋亡,增加Bcl-2表达水平、降低Bax、Cleaved-caspase3表达水平,其保护内皮细胞的机制与激活TGF-β/Smad和AMPK/eNOS信号途径有关。
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单位南方医科大学; 南方医院; 中国人民解放军广州军区武汉总医院
