实时定量PCR检测马传染性贫血病毒载量方法的建立和应用

作者：梁华; 张晓燕; 沈弢; 童骁; 马燕; 李红梅; 相文华; 沈荣显; 邵一鸣

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2005, 25(12): 1035-1039.

DOI：10.3760/j:issn:0254-5101.2005.12.022

• 马传染性贫血病毒
• 实时定量PCR
• 病毒载量

目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量PCR扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.

• 单位
  中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所