赤羽病病毒Gc405aa—480aa肽段的高效可溶性表达及抗原性鉴定

作者：王建华; 张俊哲; 赵丹; 王玉玲; 肖妍

来源：中国动物检疫, 2019, 36(03): 79-83.

• 赤羽病病毒
• Gc蛋白
• 重组肽段
• 原核表达
• 纯化
• 抗原性鉴定

为表达和鉴定赤羽病病毒Gc蛋白强抗原性肽段,对Gc蛋白的1个75氨基酸肽段(405aa—480aa)编码序列,经密码子优化后进行基因合成,构建重组表达载体p ET-Gc405aa—480aa,转化表达菌株BL21(DE3),在28℃用0.1 mmol/L IPTG诱导重组肽段表达。将重组rHis-Gc405aa—480aa肽段,通过Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化后,用Western-bloting和ELISA分析其抗原性。SDS-PAGE显示,重组rHis-Gc405aa—480aa肽段以完全可溶性形式在大肠杆菌中得到高效表达;用Ni+-NTA树脂亲和层析方法纯化,获得了较高纯度的重组rHis-Gc405aa—480aa肽段;Western-blotting显示,该重组肽段对赤羽病病毒阳性血清具有很强的反应原性。本研究表达、纯化和鉴定了具有强抗原性的重组rHis-Gc405aa—480aa肽段,为进一步开展Gc蛋白单克隆抗体制备、B细胞表位鉴定和诊断试剂研制奠定了基础。