Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

作者：殷启凯; 陈晓菁; 付士红; 刘文婧; 李樊; 雷雯雯; 何英; 许松涛; 梁国栋; 聂凯^*; 王环宇^*

来源：疾病监测, 2020, 35(03): 197-201.

DOI：10.3784/j.issn.1003-9961.2020.03.005

• Koutango病毒
• TaqMan反转录聚合酶链式反应
• 分子检测

目的建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%,定量分析模型灵敏度达到1.0×102拷贝/反应。通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6 328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 传染病预防控制国家重点实验室