双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞差减cDNA文库的构建

作者：陈玉栋; 张义兵; 朱蓉; 蒋王君; 张奇亚; 桂建芳

来源：中国病毒学(英文版), 2005, (02): 168-172.

• 牙鲆
• 草鱼出血病病毒
• 双链RNA病毒
• 抑制性差减杂交
• cDNA文库 Paralichthys olivaceus
• Grass carp hemorrhage virus
• dsRNA virus
• Suppression subtractive hybridization (SSH)
• cDNA library

以紫外线灭活的dsRNA病毒草鱼出血病病毒(GCHV)诱导和模拟诱导的牙鲆胚胎细胞为材料,利用抑制性差减杂交(SSH)技术,成功构建了双链RNA病毒诱导的牙鲆胚胎细胞(FEC)差减cDNA文库。以管家基因αtub lin作为差减指标,经检测,该文库差减效率达210倍,表明经病毒诱导后某些差异表达基因也得到了相应倍数的富集。将获得的cDNA片段连接到pGEM T载体,PCR检测显示差减片段在250bp~2 000bp之间。该差减cDNA文库的构建为从分子水平研究牙鲆培养细胞对dsRNA病毒的免疫反应、以及进一步鉴定和克隆差异表达基因打下了坚实基础。

• 单位
  中国科学院研究生院; 中国科学院水生生物研究所; 淡水生态与生物技术国家重点实验室