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摘要
本研究旨在利用CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2-Erns融合蛋白，并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL株基因序列为基础，构建融合表达BVDV E2和Erns蛋白的真核重组表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2-Erns，转染CHO细胞，进行上清分泌表达；离心收集细胞培养上清进行亲和层析纯化，通过SDS-PAGE电泳和Western-blot鉴定纯化蛋白的免疫反应性；使用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔，通过细胞免疫荧光(IFA)试验和间接ELISA试验鉴定E2-Erns融合蛋白免疫家兔血清的抗体反应性和抗体效价。结果，通过CHO细胞表达系统，成功制备了纯化的BVDV E2-Erns融合蛋白，Western-blot鉴定结果显示，His标签单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的融合蛋白发生特异性免疫反应。间接ELISA和IFA试验结果显示，一免后第7天血清抗体呈阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平可达1∶512 000，且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV发生特异性免疫反应。上述结果表明，本研究成功利用CHO细胞表达系统制备并纯化了BVDV E2-Erns融合蛋白，并通过体内和体外试验证明该融合蛋白具有良好的免疫原性，为BVD的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。
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