人源RNA解旋酶DDX1的表达、纯化及结构性质研究

作者：高宝才; 段树燕; 苏晓琴; 纪锐; 李继喜^*

来源：复旦学报(自然科学版), 2021, 60(04): 427-436.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2021.04.004

• RNA解旋酶
• DEAD-box蛋白1
• 动态光散射
• X射线小角度散射
• 同源建模

RNA解旋酶DEAD-box(DDX)蛋白家族是目前已知的最大解旋酶家族,可以解旋RNA或者解离蛋白RNA复合物;其中DDX1蛋白参与多种细胞功能,在mRNA/rRNA加工及衰减、病毒复制及转录、激素代谢以及肿瘤发生发展等各方面发挥着重要作用.但目前有关DDX1如何识别、结合和解旋RNA,如何在各种生理病理过程中发挥功能的分子基础仍然不清楚,其核心功能区的结构尚未解析.本研究成功地在大肠杆菌中重组表达和纯化了人源DDX1蛋白,获得了全长DDX1及多个不同长度截短体(或结构域)蛋白.结合动态光散射(DLS)分析发现DDX1的N端解旋酶ATP结合区结构稳定,状态均一;C末端结构域可能介导与其他蛋白相互作用,具动态变化并容易聚集.X光小角散射实验表明,溶液中DDX1全长蛋白为单体且构象均一.二级结构预测和三维结构模型构建表明DDX1具有经典的DEAD解旋酶家族特征.

• 单位
  复旦大学; 遗传工程国家重点实验室; 生命科学学院