ZO-1基因的慢病毒载体构建

作者：盛陶; 曾建平; 李辉

来源：现代生物医学进展, 2014, 14(04): 628-630.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2014.04.007

• ZO-1
• 基因克隆
• 慢病毒载体

目的:相邻两心肌纤维的连接处称心肌闰盘,它在心肌的机电活动中扮演重要角色。目前有关闰盘相关基因Cx43的研究已被广泛关注,而在不同心肌病理状态下,其变化及功能都与另一闰盘相关基因ZO-1有极为密切的联系。目前有关ZO-1的研究比较少,此次欲将猪ZO-1基因克隆到慢病毒表达载体并进行鉴定,为进一步研究其功能奠定基础。方法:利用聚合酶链反应(PCR)扩增猪ZO-1基因,并克隆到慢病毒表达载体,通过转化、抽提质粒、双酶切和测序鉴定构建的Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1重组载体。结果:猪ZO-1基因片段重组到慢病毒载体;PCR和双酶切鉴定,电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段;经测序证实成功构建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1慢病毒表达载体。结论:通过一系列实验证实Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1慢病毒表达载体构建成功,可利用其感染相关细胞或注入动物体内,为后续的体外及在体研究奠定基础,明确其在不同心肌病理状态下所发挥的独特作用。

• 单位
  中南大学湘雅二医院; 湘潭市中心医院