两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较

作者：邱淑彬; 荆韧威; 郭正隆; 谢晓东^*

来源：基因组学与应用生物学, 2020, 39(09): 4136-4144.

DOI：10.13417/j.gab.039.004136

• 原核表达
• 载体构建
• 蛋白纯化

为了比较两种不同的原核表达载体体外表达纯化CP05-GFP蛋白的能力,本研究通过构建pET28b-CP05-GFP (双His-Tag)、pET28b-CP05-GFP (单His-Tag)、pGEX-6p-1-CP05-GFP (GST-Tag)三个原核表达质粒,诱导表达并纯化带有不同标签的CP05-GFP蛋白。通过考马斯亮蓝染色技术比较两种不同的原核表达载体表达以及体外纯化CP05-GFP蛋白的能力,发现3个原核表达载体均能诱导表达出CP05-GFP蛋白,且能纯化出CP05-GFP蛋白,但是不同标签纯化CP05-GFP蛋白的纯化效率是不同的:pET28b-CP05-GFP(双His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白,但其表达量低易纯化;pET28b-CP05-GFP (单His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白,其表达量高但不易纯化;pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)原核表达系统可表达出足量的CP05-GFP (GST-Tag)蛋白,并且易纯化。本研究有助于选择合适的载体进行融合蛋白的表达和纯化。

• 单位
  天津农学院; 天津医科大学