小鼠髓源性树突状细胞分离培养及鉴定

作者：王卓; 李娴静; 冷雪娇^*

来源：药学研究, 2023, 42(02): 89-94.

DOI：10.13506/j.cnki.jpr.2023.02.003

• 小鼠骨髓细胞
• 树突状细胞
• 鉴定

目的 建立小鼠髓源性树突状细胞分离培养及鉴定方法。方法 取小鼠股骨和胫骨骨髓细胞，使用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rmGM-CSF)20 ng·mL-1联合白细胞介素-4(interleukin 4,IL-4)10 ng·mL-1诱导小鼠骨髓前体细胞分化为树突状细胞(dendritic cell)。体外培养10 d,使用流式细胞术鉴定细胞表面树突细胞特异性标志物CD11c、MHCⅡ、CD80、CD86、CD40及CCR7的表达。进一步使用OVA257-264多肽处理细胞48 h,流式细胞术分析该多肽与MHC I形成的复合物的表达，验证该细胞的抗原提呈功能。结果 依据本文方法，培养第10天每只小鼠可获得1.5×107～2×107个细胞。其中，38.4%细胞表达CD11c, CD11c阳性的细胞中有15.2%细胞表达MHCⅡ、32.3%细胞表达CD80、7.22%细胞表达CD86,但CD11c阳性的细胞中CD40阳性细胞仅4.15%,CCR7阳性细胞仅1.83%。LPS刺激24 h后，58.1%细胞表达CD11c, CD11c阳性的细胞中有39.8%细胞表达MHCⅡ,38.6%细胞表达CD80,43.1%细胞表达CD86,30.2%细胞表达CD40,10.2%细胞表达CCR7。使用该方法培养的树突细胞具有较强的抗原提呈能力。结论 本试验成功建立体外培养树突细胞的方法，可为基于树突细胞的基础研究和转化应用提供实验基础。

• 单位
  中国药科大学; 南京中医药大学