泛素结合酶E2T对急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药的影响

作者：宋传龙; 岳迎宾; 马志华; 宋曼; 阿布来提·阿不都哈尔^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(06): 589-595.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.06.012

• 急性淋巴细胞白血病
• 泛素结合酶E2T
• P53蛋白
• 泛素化
• 糖皮质激素
• 耐药

目的 探讨泛素结合酶E2T(ubiquitin-conjugating enzyme E2T, UBE2T)在急性淋巴细胞白血病细胞糖皮质激素耐药中的作用及其对泛素化介导的P53蛋白降解的影响。方法 人急性淋巴细胞白血病细胞系糖皮质激素耐药株CEM-C1和糖皮质激素敏感株CEM-C7细胞，采用实时荧光定量PCR法检测2种细胞UBE2T、p53 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测2种细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量。对数生长期CEM-C1细胞分为空白组(不进行转染)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-UBE2T组(转染sh-UBE2T)、sh-UBE2T+sh-p53组(转染sh-UBE2T和sh-p53),转染48 h后采用实时荧光定量PCR法检测4组UBE2T、p53 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测4组细胞UBE2T、P53蛋白相对表达量，采用CCK-8法检测4组细胞增殖率及地塞米松对CEM-C1细胞的半数抑制浓度，采用流式细胞术检测4组细胞凋亡率，采用Transwell实验检测4组迁移细胞数和侵袭细胞数；采用放线菌酮蛋白合成抑制实验检测sh-UBE2T组与sh-NC组细胞P53蛋白半衰期，采用免疫共沉淀实验检测sh-UBE2T组与sh-NC组细胞P53蛋白泛素化水平。结果 CEM-C1细胞UBE2T mRNA和蛋白相对表达量(2.38±0.14、0.85±0.07)均高于CEM-C7细胞(1.00±0.03、0.43±0.02)(t=15.351,P=0.017;t=13.789,P=0.022),p53 mRNA和P53蛋白相对表达量(0.47±0.01、0.23±0.04)均低于CEM-C7细胞(1.00±0.02、0.61±0.06)(t=13.280,P=0.035;t=14.092,P=0.019)。sh-UBE2T+sh-p53组(0.33±0.04、0.28±0.01)、sh-UBE2T组(0.35±0.09、0.27±0.01)细胞UBE2T mRNA和蛋白相对表达量低于空白组(1.01±0.01、1.02±0.01)、sh-NC组(1.00±0.02、1.07±0.02)(P<0.05),sh-UBE2T+sh-p53组与sh-UBE2T组比较差异均无统计学意义(P>0.05);sh-UBE2T+sh-p53组细胞p53 mRNA(0.12±0.01)和P53蛋白(0.19±0.02)相对表达量均低于sh-UBE2T组(0.98±0.04、1.28±0.04)、空白组(1.00±0.01、0.25±0.01)、sh-NC组(1.00±0.03、0.26±0.02)(P<0.05);sh-UBE2T组细胞p53 mRNA相对表达量与空白组、sh-NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05),P53蛋白相对表达量均高于空白组、sh-NC组(P>0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组不同浓度地塞米松下细胞增殖率、地塞米松对CEM-C1细胞的半数抑制浓度均低于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组低于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组迁移细胞数、侵袭细胞数少于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组少于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);sh-UBE2T+sh-p53组、sh-UBE2T组细胞凋亡率高于空白组、sh-NC组(P<0.05),sh-UBE2T组高于sh-UBE2T+sh-p53组(P<0.05);以上指标比较空白组与sh-NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05);sh-UBE2T组在放线菌酮处理CEM-C1细胞15、30、45 min时P53蛋白相对表达量均高于sh-NC组(P<0.05),P53泛素化水平(24.86±5.26)低于sh-NC组(154.42±12.45)(t=-16.603,P<0.001)。结论 UBE2T通过介导P53蛋白泛素化和降解，促进糖皮质激素诱导的CEM-C1细胞增殖、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡，从而促进CEM-C1细胞对糖皮质激素耐药。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院