组蛋白去乙酰化酶HDAC2突变体构建及其SUMO修饰E3连接酶功能研究

作者：郭韡; 熊渊; 黄宏; 邢伟; 李向云; 徐祥

来源：现代生物医学进展, 2013, 13(06): 1005-1008.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2013.06.002

• HDAC2
• 突变体
• SUMO修饰
• E3连接酶 HDAC2
• Mutant
• Sumolation
• E3 Ligase

目的:针对人源HDAC2外显子拼接功能区(CDS)基因,运用双管法突变体构建技术,构建HDAC2去乙酰化酶功能失活的片段缺失与关键位点突变体,检测突变体的SUMO化修饰E3连接酶功能活性,探究此HDAC2新功能是否受到其固有的去乙酰化酶功能的影响。方法:设计HDAC2 100-322位氨基酸密码子缺失的片段突变体引物与142位H→A点突变体引物,利用HDAC2的pcDNA3.1真核表达质粒为模板,通过耐热Fusion酶PCR反应双管扩增相应的单链DNA,并经退火、模板酶切、乙醇纯化、感受态转化、抗性平板筛选、测序鉴定获得两种HDAC2去乙酰化酶功能失活的pcDNA3.1真核表达质粒。免疫印迹检...

• 单位
  创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室; 重庆市巴南区人民医院; 第三军医大学大坪医院