胸膜肺炎放线杆菌血清10型apxIC~-/P36~+弱毒株的构建与鉴定

作者：邹浩勇; 陈杨; 刘新军; 何启盖; 陈品; 周锐; 马丰英; 汪洋

来源：微生物学报, 2009, (09): 1209-1216.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.2009.09.022

• 胸膜肺炎放线杆菌
• apxIC基因
• 猪肺炎支原体
• P36基因
• 接合转移
• 负向筛选 Actinobacillus pleuropneumoniae
• apxIC gene
• Mycoplasma hyopneumoniae
• P36
• transconjugation
• counterselection

【目的】构建血清10型胸膜肺炎放线杆菌弱毒菌株,为胸膜肺炎放线杆菌减毒活疫苗研究奠定基础。【方法】通过细菌接合转移和SacB负向筛选标记完成突变株的构建与筛选,用PCR、Western blot、重组位点序列对突变株进行鉴定分析。首先构建含肺炎支原体P36基因的pEICALDH重组转移质粒,并转化供体大肠杆菌(E.coliX7213),将转化的阳性克隆子与野生型APP血清10型亲本菌混合培养6h;然后涂至含氯霉素抗性和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的TSA培养基培养,挑取阳性克隆,接种至无抗性的含NAD的TSB液体培养基,培养6～8h后涂至含10%的蔗糖及NAD的TSA培养基,培养24h后挑取...

• 单位
  农业微生物学国家重点实验室