山葡萄F3’5’H基因的克隆与表达及其启动子5′端缺失片段的功能分析

作者：张宇; 刘海峰^*

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2022, 43(03): 26-33.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2022.03.004

• 山葡萄
• 类黄酮-3’,5’-羟化酶
• 启动子
• 功能分析

通过克隆山葡萄（Vitis amurensis）类黄酮-3’5’-羟化酶（flavonoid-3’,5’-hydroxylase,F3’5’H）基因及其启动子，并进行基因的原核表达和启动子不同缺失片段的瞬时表达，研究山葡萄不同种类花色苷的形成机制。克隆得到F3’5’H基因全长1 527bp，分析其理化性质发现，‘双红’品种F3’5’H较‘双丰’品种有所差异，通过对F3’5’H重组蛋白体外表达条件的探究，在温度为25℃、培养时间为11h且IPTG浓度为0.8mmol·L-1的条件下，目的蛋白在上清样品中有与预测重组蛋白分子量大小一致且较高浓度的表达带。山葡萄F3’5’H基因启动子序列共1 271bp，启动子序列中除具有核心启动子元件CAAT-box和TATA-box外，还有一系列光响应元件。采用启动子缺失技术研究不同长度缺失片段启动子在烟草中的瞬时表达，发现随着F3’5’H启动子缺失片段长度的增加，GUS酶活性呈先上升后下降的趋势。

• 单位
  吉林省农业科学院; 延边大学