鼠表皮生长因子受体胞外段原核表达、纯化与复性

作者：胡兵; 田聆; 卢铀; 杨莉; 赵霞; 刘继彦; 魏于全

来源：生物医学工程学杂志, 2010, (02): 264-267.

• 表皮生长因子受体
• 原核表达
• 同源二聚
• 免疫原性

用多聚酶链反应 (PCR)方法从既往构建质粒扩增鼠表皮生长因子受体 (EGFR)胞外段基因及适宜酶切位点 ,进而构建原核表达载体。克服质粒丢失的不足 ,在大肠杆菌中表达目的蛋白 ,并在变性条件下通过 Ni2 +柱亲和层析纯化表达蛋白 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)示纯度在 95 %以上。去除组氨酸标记的纯化蛋白在梯度尿素中透析复性。复性蛋白在表皮生长因子的作用下可以同源二聚化而在非还原 SDS- PAGE及蛋白印迹分析中呈二聚体状态 ,其所产生抗体可以识别复性蛋白及表达于肺癌细胞上的 EGFR,提示复性后大肠杆菌表达鼠EGFR胞外段重组蛋白已获得一定空间结构 ,并具有免疫原性 ,可以进一步用于 EGFR功能及免疫学研究

• 单位
  四川大学; 四川大学华西医院