单链抗体融合蛋白FvCA4-218-AP原核表达条件优化及活性检测

作者：赵雪; 李淑琴; 李世美; 于欢; 尚国富; 彭晓燕; 黄江涛; 曾柱^*; 胡祖权^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z3: 3277-3282.

DOI：10.13417/j.gab.040.003277

• 镰刀菌
• 融合蛋白
• 碱性磷酶酶
• 免疫检测
• 原核表达条件

为实现抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP在大肠杆菌中可溶性高效表达，本研究在不同诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件下培养重组大肠杆菌XL1-Blue [pDAP2/S-(Fv CA4-218-AP)]，收集诱导培养的菌液，经过超声波破碎处理后离心收集总蛋白，并通过碱性磷酸酶直接显色法、Western blot和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分析抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的表达量、可溶性和活性等表达情况。结果显示在重组大肠杆菌培养至OD600为0.5时加入0.5 mmol/L IPTG，在25℃诱导表达6～8 h可获得较高表达量和活性的可溶性融合蛋白。因此，通过优化原核表达的诱导温度、IPTG浓度和诱导时间等条件，可以显著提高抗镰刀菌单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白Fv CA4-218-AP的表达水平，为发展快速免疫检测方法提供了实验基础。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院