云南金花茶SSR-PCR反应体系的建立与优化

作者：李显煌; 高丽云; 王娟; 张贵良; 唐军荣; 叶鹏; 雷瀚; 辛培尧^*

来源：中南林业科技大学学报, 2019, 39(08): 101-108.

DOI：10.14067/j.cnki.1673-923x.2019.08.015

• 云南金花茶
• SSR-PCR
• 体系建立
• 优化

以云南金花茶为试验材料,利用试剂盒法、SDS法及CTAB法3种方法提取其DNA,并对3种方法的提取结果进行比较;经初筛合成云南金花茶EST-SSR引物,并对影响SSR-PCR体系的Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物及模板DNA这5个因素进行L16(45)正交实验,以期建立较为稳定的云南金花茶SSR-PCR体系。试验结果表明:试剂盒法提取得到的云南金花茶DNA质量最好且符合SSR分子标记试验。各因素对PCR扩增效果的影响程度为:Mg2+>引物> Taq DNA聚合酶> dNTP>模板DNA。试验最终确定的金花茶SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:2.0μL Taq Buffer、1.5μL Mg2+(25 mmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.2μL Taq DNA聚合酶(5 U/μL)、前后引物各0.4μL(10μmol/L)、0.5μL模板DNA(50 ng/μL)、14.7μL ddH2O。建立和优化云南金花茶SSR反应体系,可为云南金花茶不同种群的遗传变异研究提供基础。

• 单位
  西南林业大学