人载脂蛋白A-I的原核表达及二级结构和功能鉴定

作者：祝学卫; 吴钢; 曾武威; 薛红; 陈保生

来源：基础医学与临床, 2006, (04): 376-380.

• 人载脂蛋白A-I
• 原核表达
• α螺旋含量
• 脂质结合
• 细胞胆固醇外流 human apolipoprotein A-Ⅰ
• prokaryotic expression
• α helical content
• lipid binding
• cellular cholesterol efflux

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化。分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价。结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比...

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 中国协和医科大学; 中国医学科学院