水牛外周血来源树突状细胞体外诱导培养与鉴定

作者：杨曦; 梅雪芳; 曾子轩; 王冬英; 黄维义^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2020, (19): 16-20.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.12.0389

• 外周血单个核细胞
• 树突状细胞
• 水牛
• 流式细胞术
• 光学显微镜
• 扫描电子显微镜
• 透射电子显微镜

为了建立一种体外诱导培养水牛外周血来源树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法,试验分离了水牛外周血来源的单个核细胞(PBMC),在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL-4)联合作用下进行诱导分化,并以LPS诱导的未成熟树突状细胞发育为成熟树突状细胞作对照组,通过显微镜(光学显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜)和流式细胞术分别对获得的细胞进行形态学观察和表型鉴定。结果表明:PBMC在50 ng/mL GM-CSF和50 ng/mL IL-4体外持续作用6 d后,流式细胞术检测表现出CD11chighMHCⅡmedCD40medCD86low的表型特征,与未成熟树突状细胞的一般表型特征相符。培养至第4天,圆形的PBMC开始呈现出不规则状态;培养至第6天,可在细胞膜上观察到小的微绒毛、突起和细胞聚集等未成熟树突状细胞的形态特征,与表型鉴定结果一致。在LPS的进一步作用下,PBMC呈现出成熟树突状细胞的典型形态。说明GM-CSF和IL-4联合作用可以获得未成熟树突状细胞,并且该细胞可以在LPS的进一步作用下发育成熟,通过该方法可以获得足量的水牛树突状细胞以满足试验需求。

• 单位
  广西大学