红斑丹毒丝菌SpaA的分段克隆及表达

作者：马艳杰; 戚百川; 裴世璇; 薛云; 司丽芳; 王臣; ***; 赵战勤^*

来源：中国预防兽医学报, 2022, 44(01): 16-21.

• 红斑丹毒丝菌
• SpaA蛋白
• 表达
• 纯化
• western blot

为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段，本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段，采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段，利用原核表达系统克隆并表达后采用SDS-PAGE和western blot检测表达及纯化情况。结果显示，获得7个重组蛋白，分别命名为rSpaA1～rSpaA7，其表达量占菌体总蛋白的17.44%～25.38%，其中rSpaA1、rSpaA2、r SpaA5以包涵体形式表达，r SpaA3以可溶性蛋白形式表达，而rSpaA4、rSpaA6、rSpaA7两种表达形式同时存在。纯化后，rSpaA1～rSpaA7的纯度介于84.22%～93.72%，浓度为0.89 mg/mL～3.25 mg/mL。Western blot结果显示，7个重组蛋白均显示出良好的反应原性，其中rSpaA1、rSpaA3、rSpaA4的反应原性更强。本研究实现了对红斑丹毒丝菌SpaA的分段及其全长的表达和纯化，为SpaA保护性抗原片段的筛选及猪丹毒亚单位疫苗的研发奠定基础。

• 单位
  动物科技学院; 河南科技大学