CHO细胞基因组NW-003614092.1内稳定表达位点的发现

作者：瞿丽丽; 丁学峰; 蔡燕飞; 鲁晨; 李华钟; 金坚; 陈蕴^*

来源：中国生物工程杂志, 2022, 42(06): 12-19.

DOI：10.13523/j.cb.2202035

• CHO
• 稳定位点
• 染色体步移
• CRISPR/Cas9

目的：获得中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells, CHO)内稳定表达位点信息，为构建重组蛋白CHO稳定表达株、缩短研发时间线提供信息明确的稳定位点。方法：对慢病毒随机整合Zsgreen1基因的具有潜在稳定表达位点的CHO-K1-1d2细胞株进行连续传代培养，验证表达稳定性；通过染色体步移分析慢病毒载体整合位点，并利用CRISPR/Cas9技术验证位点的可编辑性。结果：CHO-K1-1d2细胞在连续贴壁培养20代、悬浮培养50代过程中，能够100%发绿色荧光，且荧光强度稳定，能够稳定表达Zsgreen1蛋白；染色体步移分析测序结果表明，CHO-K1-1d2细胞中慢病毒载体整合于CHO细胞基因组NW-003614092.1上第1 159 463与1 159 467碱基间；共转染sgRNA与Cas9质粒后，测序结果表明，该位点可被CRISPR/Cas9技术编辑。结论：CHO细胞基因组NW-003614092.1内存在一个信息明确的、能够被CRISPR/Cas9技术编辑的稳定表达位点。

• 单位
  生物工程学院; 江南大学