应用CRISPR/Cas9系统构建敲除APE1基因的AC16心肌细胞株

作者：郭润民; 卫月; 姜佳美; 陈铭亮; 王志强^*

来源：解剖学研究, 2019, 41(05): 438-441.

• CRISPR/Cas9系统
• 脱嘌呤/嘧啶核酸内切酶1
• AC16心肌细胞株
• 基因敲除

目的应用CRISPR/Cas9系统构建敲除APE1基因的AC16心肌细胞株,为研究APE1在心肌细胞的功能提供研究基础。方法根据RISPR/Cas9靶向原理设计人APE1基因的导向RNA(sgRNA),构建sgRNA-LentiCRISPRV2重组质粒并转入293T细胞制备sgRNA-Cas9慢病毒;该病毒浸染AC16心肌细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆。免疫印迹法测定单克隆细胞中APE1蛋白表达。结果免疫印迹法检测的结果显示,筛选出的单克隆细胞的APE1蛋白表达完全缺失;PCR产物测序结果表明,靶向敲除APE1的心肌细胞,不存在sgRNA介导CRISPR-Cas9随机的核苷酸插入。结论应用CRISPR/Cas9系统成功构建了敲除APE1基因的AC16心肌细胞株。

• 单位
  广东医科大学附属医院; 佛山市顺德区妇幼保健院; 广东医科大学顺德妇女儿童医院