H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体的构建及其在MCF-7细胞中的表达

作者：高秀丽; 段文博^*; 王婧; 王涛; 任珊

来源：中国比较医学杂志, 2021, 31(02): 24-29.

• H2A.X
• NPM1
• 哺乳动物双杂交表达载体
• 乳腺癌

目的构建人源组蛋白H2A.X和核仁磷蛋白NPM1哺乳动物双杂交表达载体,并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达。方法 PCR扩增H2A.X及NPM1基因表达序列,TA克隆后连接至p BIND和PACT载体,双酶切和测序验证后转染MCF-7细胞,RT-PCR检测表达效果。结果 PCR结果产生与H2A.X和NPM1编码序列大小一致DNA片段;目的片段的TA,p BIND,PACT克隆及双酶切验证后均产生预期大小DNA片段;测序结果表明所构建的H2A.X-pBIND和NPM1-PACT产生的DNA序列同H2A.X和NPM1编码序列完全匹配;转染H2A.X-pBIND和NPM1-PACT表达载体的细胞相应mRNA表达水平明显增加。结论成功构建H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,为研究乳腺癌中二者的相互作用及功能提供实验基础。

• 单位
  齐齐哈尔医学院