剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

作者：杨子平; 孙艺桓; 杨倩; 鹿志伟; 张燕梅; 李俊峰; 周文钊^*

来源：热带作物学报, 2020, 41(09): 1748-1755.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2020.09.004

• 剑麻
• AhKNOX2
• 酵母双杂交
• cDNA文库
• 蛋白质相互作用

植物KNOX(Knotted1-likehomeobox)可通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件。为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵筛选与之相互作用的蛋白。结果表明:文库总容量为3.9’106CFU,转化效率为9.15’105CFU/μgpGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5～3.0kb之间,重组率为92%,保存的文库细胞密度为1.35’108/mL,文库滴度为2.22’107 CFU/mL。构建的pGBKT7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5 mmol/L的3-氨基-1,2,4-三唑(3-Amino-1,2,4-triazole,3-AT)能抑制诱饵载体的自激活,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白。本研究成功构建剑麻叶片酵母表达文库,并筛选获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,该结果为进一步研究AhKNOX2在剑麻中的功能奠定前期基础,为培育高纤维产量的剑麻新品种提供基因资源和理论基础。

• 单位
  中国农业科学院蔬菜花卉研究所; 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所