毛梾SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作者：王开芳; 燕丽萍; 任飞; 赵登超; 孙超; 刘翠兰^*; **军^*

来源：分子植物育种, 2019, 17(23): 7834-7839.

DOI：10.13271/j.mpb.017.007834

• 毛梾(Cornus walteri)
• SSR-PCR
• 正交设计
• 引物筛选

为了确定毛梾SSR-PCR最佳的反应体系,本研究采用L16(45)正交设计试验方法对毛梾SSR-PCR反应体系的各影响因素进行了优化筛选,利用改良CTAB法提取毛梾叶片基因组DNA为模板,对模板DNA、dNTPs、Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶5个因素的用量进行了4个水平的优化筛选试验。结果显示,适用于毛梾的SSR-PCR最佳反应体系为:总体系20μL,dNTPs浓度0.25 mmol/L,Mg2+浓度1.25 mmol/L,模板DNA用量为75 ng,Taq DNA聚合酶1 U/20μL,引物浓度为0.5 mmol/L。利用优化后的反应体系对毛梾SSR引物进行筛选,可从34对引物中筛选出9对具有多态性的SSR引物,进一步验证了毛梾SSR-PCR反应体系具有较好的稳定性和可重复性。本研究为毛梾的种质资源分析、分子标记辅助育种、遗传多样性分析等方面的进一步研究提供了技术支持。

• 单位
  山东省林业科学研究院