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摘要
目的:探讨麻仁丸对阿片类药物相关性便秘(OIC)大鼠的治疗作用及可能机制。方法:取100只Wistar大鼠皮下注射盐酸吗啡1.75 mg/kg,1次/d,连续45 d建立OIC大鼠模型,另取20只大鼠同步注射相应体积生理盐水作为正常对照组。造模成功后按照随机数字表法分为模型组、鲁比前列酮(43.2μg/kg)组及麻仁丸低(5.4 g/kg)、中(10.8 g/kg)、高(21.6 g/kg)剂量组,每组20只,每组组内随机分为2个亚组分别用于体内、体外实验。各组灌胃给药,1次/d,连续1 w;正常对照组及模型组灌胃相应体积超纯水。给药结束24 h后处死其中一亚组大鼠,检测其粪便含水量;酶联免疫法(ELISA)检测大鼠结肠组织中VIP、5-HT、PGE_2、Ach、cAMP、PKA水平;免疫组化观察大鼠结肠组织中AQP3、CFTR表达;qRT-PCR、Western Blot分别检测大鼠结肠组织中AQP3、CFTR mRNA及蛋白表达。另一亚组大鼠禁食24 h后处死,解剖分离其远端结肠,采用恒温灌流装置体外测量不同药物干预后结肠上皮的短路电流(I_(sc)),ELISA检测大鼠结肠上皮细胞内cAMP、PKA含量。结果:与模型组比较,各给药组粪便含水量升高,结肠组织中VIP、PGE_2、Ach、cAMP、PKA水平和CFTR mRNA及蛋白表达显著升高,5-HT水平和AQP3 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。免疫组化结果显示,AQP3、CFTR阳性细胞主要分布于结肠黏膜表层柱状上皮,且均为胞质着色,各给药组较模型组结肠组织中AQP3表达下调,CFTR表达上调(P<0.05)。0.5～100 mg/mL麻仁丸刺激结肠上皮产生的I_(sc),呈剂量依赖性升高,半最大效应浓度(EC_(50))为8.27 mg/mL;CFTR_(inh)172、MDL-12330A、amiloride、H89均抑制结肠上皮基础状态下的I_(sc),鲁比前列酮、HgCl_2、forskolin均促进结肠上皮基础状态下的I_(sc)。与正常对照组比较,麻仁丸组结肠上皮细胞内cAMP、PKA含量升高,MDL-12330A组结肠上皮细胞内cAMP、PKA含量显著降低(P<0.05);与麻仁丸组比较,MDL-12330A组、麻仁丸+MDL-12330A组结肠上皮细胞内cAMP、PKA含量显著降低(P<0.05);与MDL-12330A组比较,麻仁丸+MDL-12330A组结肠上皮细胞内cAMP、PKA含量升高(P<0.05)。结论:麻仁丸对OIC大鼠具有增液、润肠功效,作用机制可能与调控cAMP-PKA-AQP3/CFTR信号通路,调节结肠水液代谢有关。
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单位川北医学院; 川北医学院附属医院
